硝基四氮唑蓝法是酶法还是化学法-硝基四氮唑蓝还原试验特点

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问题分析：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，俗称“蚕豆病”，是一种染色体异常的遗传性溶血性疾病。

自身溶血试验无诊断价值。在一些严重G-6-PD缺乏症患者，由于白细胞G-6-PD缺乏症可出现白细胞功能缺陷，主要是噬菌活性减低，因而临床主要表现为过氧化物酶阳性细菌的反复感染。

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红细胞葡萄糖－6磷酸脱氢酶缺乏症就是其中的一种，要检查是否缺乏化验室最常用的方法就是高铁血红蛋白还原实验。正常参考值：高铁血红蛋白还原率0.75。如果检查结果低于这个标准值，证明你患有G-6-PD缺乏症。

【答案】：C 葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症的确诊实验是G-6-PD荧光斑点法。

当被测样品中含有SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值。如果用分光光度计，最好设定黑暗和照光作为对照。

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．酶液制备称取植物组织0.5g先加入5ml PBS，研磨匀浆后，再加入5ml PBS混匀，4℃下10000r/min离心15min 上清液即为粗酶液。取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。

超氧化物歧化酶的临床化验，如果数值低于正常值，可能提示患有病毒性心肌炎、肺炎、贫血、溶血性疾病、糖尿病等。

氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力原理超氧物歧化酶（superoxidedi***utase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。

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应用领域由于它的氧化性能和电化学特性，CNL被广泛应用于许多领域。其中最常见的用途是作为化学反应的催化剂和氧化剂。它在某些情况下也可以用作爆炸物、烟雾弹和红外发射剂。

NBT，即Nitrotetrazolium Blue chloride，中文名为氯化硝基四氮唑蓝。常和bcip配成混合液，为碱性磷酸酶底物之一，在碱性磷酸酶的催化下生成不溶性的蓝色产物。常用于免疫组化（IHC）、免疫细胞化学（ICC）和蛋白印迹（WB）等实验。

硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验主要用于检测中性粒细胞的胞内杀伤功能，当机体发生细菌、真菌和***感染的时候，中性粒细胞的杀菌能力增强，还原NBT的能力增强，但是***感染或非感染疾病则不增高。

硝基四氮唑蓝还原试验的原理是：硝基四氮唑蓝（NBT）可接受氢离子而被还原为非水溶性的蓝黑色甲月替颗粒，呈点状或片状沉淀在中性粒细胞胞浆内有酶活性的部位，可在显微镜下观察并计数阳性细胞百分率。

本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。

代谢中所脱的氢还原氮蓝四唑成为蓝黑色的点状或块状物，沉积于粒细胞胞质中，根据细胞内沉积颗粒判断阳性率。本试验主要用于检测中性粒细胞的胞内杀伤功能，可以用于诊断儿童慢性肉芽肿病，以及用于鉴别细菌性和病毒性感染。

如加入硝基蓝四氮唑，则可被吞噬或渗透到中性粒细胞胞质中，接受所脱的氢，使原来淡***的NBT还原成点状或块状的蓝黑色颗粒，沉积于中性粒细胞中，称NBT阳性细胞。

⑤呈色剂：溶解NBT82mg于20ml蒸馏水中，可稍加热助溶，不溶物需离心去除。再加入NAD＋200mg，最后中入PMS 5mg，混合后置棕色瓶中，4℃保存，至少可用6个月。

0.11mol/L NBT试剂：称取氯化硝基四氮唑蓝100mg，用上述缓冲液溶解并稀释至1000ml，置冰箱保存，至少可稳定3个月。（3）4mmol/L DMF标准液：称取DMF96mg，溶于40g/L牛血清白蛋白溶液100ml中。

在结扎后短时间、光镜下心肌梗死病变尚未充分发展之前，可用心脏标本组织化学染色显示心肌缺血造成的脱氢酶活性脱失。例如将心肌组织放入新配制的盐酸硝基四氮唑蓝溶液中，正常心肌呈蓝色，梗死心肌不着色。并可藉以计算梗死范围。

直接法原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。

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